一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介

動(dòng)物體內(nèi)發(fā)光，一般是將螢火蟲熒光素酶基因穩(wěn)定整合至靶細(xì)胞染色體DNA，構(gòu)建持續(xù)表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞增殖、遷移或分化時(shí)，熒光素酶同步穩(wěn)定表達(dá)。將穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞導(dǎo)入研究動(dòng)物如大/小鼠體內(nèi)，之后注射底物熒光素（luciferin），通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。

D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin Potassium Salt）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，其在540-600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)發(fā)藍(lán)綠光。其作用機(jī)制是在有氧環(huán)境下，熒光素在熒光素酶和Mg2⁺的催化作用下與ATP發(fā)生反應(yīng)，生成熒光素-AMP復(fù)合體并釋放出焦磷酸(PPi)。隨后，熒光素-AMP復(fù)合體在O₂的作用下進(jìn)一步生成氧化熒光素，同時(shí)釋放出CO₂和H₂O。在這個(gè)過程中，激發(fā)態(tài)的氧化熒光素返回到基態(tài)時(shí)會(huì)發(fā)出光子。熒光素所發(fā)的光更容易透過組織，在體內(nèi)代謝較慢，而且特異性好。所以大部分活體成像實(shí)驗(yàn)采用螢火蟲熒光素酶基因作為報(bào)告基因。

二、產(chǎn)品應(yīng)用場(chǎng)景

1、體外生物發(fā)光檢測(cè)

（1）D-熒光素鉀鹽體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用場(chǎng)景

報(bào)告基因檢測(cè)：D-熒光素鉀鹽作為底物，用于基于熒光素酶（Luc）的報(bào)告基因檢測(cè)。通過Luc催化其反應(yīng)產(chǎn)生的生物發(fā)光強(qiáng)度，可定量反映與其融合的目標(biāo)基因的表達(dá)水平；

高通量藥物篩選：將熒光素酶基因（Luc）作為報(bào)告基因與目標(biāo)基因融合表達(dá)，通過檢測(cè)其生物發(fā)光強(qiáng)度，可快速篩選調(diào)控目標(biāo)基因表達(dá)的化合物；

ATP含量檢測(cè)：D-熒光素鉀鹽通過ATP依賴的熒光素酶反應(yīng)，將細(xì)胞內(nèi)ATP水平轉(zhuǎn)化為生物發(fā)光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)，可直接反映細(xì)胞代謝狀態(tài)；

樣品污染檢測(cè)：ATP-熒光素酶生物傳感系統(tǒng)通過檢測(cè)活體生物共有的ATP信號(hào)，實(shí)現(xiàn)生物污染的高敏實(shí)時(shí)判定。

（2）體外D-熒光素鉀鹽使用方法

①用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30 mg/mL的儲(chǔ)存液 (100-200×) ，混勻。立即使用，或分裝于-80℃避光保存（僅限凍融1次），避免反復(fù)凍融；

②用預(yù)熱好的培養(yǎng)基將儲(chǔ)存液稀釋至0.15-0.3 mg/mL的工作液濃度（工作液推薦現(xiàn)配現(xiàn)用）；

③去除細(xì)胞培養(yǎng)基；

④待圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)添加D-熒光素鉀鹽工作液，37℃ 孵育5-10 min，然后進(jìn)行圖像分析。

2、體內(nèi)活體成像

一個(gè)完整的生物發(fā)光活體成像過程包括構(gòu)建熒光素酶重組質(zhì)粒、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和篩選、熒光素酶活性鑒定陽性克隆，再將陽性克隆細(xì)胞移植到體內(nèi)建立動(dòng)物模型，進(jìn)而通過小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)特定部位發(fā)出的熒光信號(hào)。

（1）體內(nèi)D-熒光素鉀鹽使用方法

①用無菌的DPBS（abs970，w/o Mg2+、Ca2+）配制30 mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻。

②用0.2 µm濾膜（abs7298）過濾除菌。立即使用，或分裝于-80℃避光保存（僅限凍融1次），避免反復(fù)凍融。使用時(shí) 4℃融化，實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫（避光）。 

③腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射（現(xiàn)配現(xiàn)用）。

④注射入體內(nèi)10-15 min（待光信號(hào)達(dá)到較強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。

注意：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定最高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。

（2）體內(nèi)活體成像驗(yàn)證數(shù)據(jù)

Absin國(guó)產(chǎn)D-熒光素鉀鹽與某進(jìn)口品牌發(fā)光強(qiáng)度對(duì)比，無顯著性差異。

三、常見問題解答

1、熒光素酶底物有哪些，如何選擇？

D-熒光素、D-熒光素鉀鹽和D-熒光素鈉鹽是常見的熒光素酶底物，主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中常用D-熒光素鉀鹽。

2、D-熒光素鉀鹽如何保存？

（1）D-熒光素鉀鹽優(yōu)先推薦于-80 ℃（若實(shí)驗(yàn)室無-80℃冰箱，可使用-20℃）避光儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月；

（2）復(fù)溶后的儲(chǔ)備液推薦分裝避光凍存于-80 ℃（僅限凍融1次），避免反復(fù)凍融，盡量在3個(gè)月內(nèi)使用；

（3）工作液推薦現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解嗎？

D-熒光素鉀鹽體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通常無需裂解，因其水溶性和脂溶性良好，可自然穿透細(xì)胞膜，直接在活細(xì)胞內(nèi)與熒光素酶反應(yīng)發(fā)光。但若需定量檢測(cè)熒光素酶活性（如報(bào)告基因分析）或ATP水平，則需裂解細(xì)胞以釋放酶，再與底物反應(yīng)，通過發(fā)光強(qiáng)度定量酶/ATP含量。

本期產(chǎn)品推薦

相關(guān)產(chǎn)品推薦

好消息！Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)！

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...