一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1、hPSC誘導(dǎo)分化胰島類器官試劑盒（abs90131-1kit）

產(chǎn)品組成：

2、輔助試劑

3、實(shí)驗(yàn)耗材

二、誘導(dǎo)流程圖

三、試劑盒使用流程：

①EB 形成（2 天）

1、hPSC 于基質(zhì)膠包被的標(biāo)準(zhǔn)透明6孔板的一個(gè)孔，加入2mLAdvance 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，使細(xì)胞生長至 70-80%匯合度。

2、將孔中的培養(yǎng)基吸除。

3、在消化期間配置EB形成wan全培養(yǎng)基：取 11mL EB 形成培養(yǎng)基與 22μL EB 形成補(bǔ)充劑混勻獲得 EB 形成wan全培養(yǎng)基，于一個(gè)新的超低吸附 6孔板的 3 個(gè)孔每孔加入 2mL EB 形成wan全培養(yǎng)基，準(zhǔn)備后續(xù)使用。

4、向孔中加入 1mL PBS（無鈣鎂離子）洗，吸去。

5、向孔中加入 1mL accutase，37℃消化 3min。

6、當(dāng)看到克隆發(fā)白發(fā)亮，輕輕拍打板側(cè)（每側(cè)拍兩下），把細(xì)胞拍下來，再在生物安全柜中，加入 1mL EB 形成wan全培養(yǎng)基終止消化，把這 2mL 體系吸入裝有 3mL EB 形成wan全培養(yǎng)基的15mL 離心管離心 160g 5min，吸棄上清至剩余幾十微升，輕彈管底 3-4 下，讓細(xì)胞沉淀溶于上清。

7、往管里加 1mL EB 形成wan全培養(yǎng)基，輕彈 3-4 下，混勻即可，把這1mL細(xì)胞懸液平均懸空加入提前準(zhǔn)備的超低吸附 6孔板3 個(gè)孔中，37℃、5%CO₂過夜。

8、第二天（D-1）鏡下觀察可以看到形成大量、均一的 EB，半數(shù)換液，補(bǔ)充 50%EB 形成培養(yǎng)基（不含補(bǔ)充劑），置于水平搖床培養(yǎng)。（注意：所用培養(yǎng)基均應(yīng)提前在工作臺(tái)放置 30min以恢復(fù)室溫，后面操作同理。）

②DE 誘導(dǎo)（5 天）

9、D0，解凍補(bǔ)充劑 A，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 與補(bǔ)充劑 A 混勻，作為 DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，恢復(fù)室溫。

10、吸出孔中 EB 形成培養(yǎng)基，注意不要將 EB 吸出。

11、每孔加入 2mL DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，放入 37℃，5%CO₂的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

12、每天更換 DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，持續(xù) 5 天。

③PE 誘導(dǎo)（6天）

13、D5，解凍補(bǔ)充劑 B，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2 與補(bǔ)充劑 B 混勻，作為 PE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。每孔每天更換 2mL PE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù) 6 天。

④EP 誘導(dǎo)（5天）

14、D11，解凍補(bǔ)充劑 C，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 3 與補(bǔ)充劑 C 混勻，作為 EP 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。每孔每天更換 2mL EP 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù) 5 天。

⑤胰島類器官成熟階段（以20天為例）

15、D16，解凍補(bǔ)充劑D，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基4與補(bǔ)充劑D混勻，作為胰島類器官成熟培養(yǎng)基。每孔每天更換2mL成熟培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù)20天。

本期小愛推薦

好消息！Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)！

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...