組織微環(huán)境中有復(fù)雜的細(xì)胞組成，這些細(xì)胞的表型、狀態(tài)、豐度、分布都有著重要的生物學(xué)意義和臨床價值。借助抗體染色可以將其在組織原位上呈現(xiàn)出來。免疫組化染色是一種研究組織形態(tài)和原位蛋白表達(dá)的常見技術(shù)，常規(guī)IHC檢測只能展示單一指標(biāo)，難以呈現(xiàn)復(fù)雜的組織微環(huán)境中的細(xì)胞組成、狀態(tài)和關(guān)系，而這些信息對疾病的診斷和治療至關(guān)重要！
酪氨信號放大技術(shù)原理：類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法，TSA技術(shù)同樣采用HRP標(biāo)記的二抗，HRP催化加入體系的熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨suan共價結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價結(jié)合熒光素。之后用熱修復(fù)法洗去非共價結(jié)合的抗體，換下一種一抗來第二輪孵育，換另一種熒光素底物，如此往復(fù)就可實現(xiàn)多重標(biāo)記。

TSA單色熒光染料520、TSA單色熒光染料540、TSA單色熒光染料570、TSA單色熒光染料620、TSA單色熒光染料650、TSA單色熒光染料700、信號放大反應(yīng)液、鼠兔通用型HRP標(biāo)記二抗、抗熒光淬滅封片、DAPI

1、淬滅、通透、封閉

a）從冰箱中取出冷凍玻片，恢復(fù)至室溫，PBST浸洗3min，重復(fù)3次

b）10%中性福爾馬林或4%多聚甲醛浸片10-30min，滅菌水洗片1min，重復(fù)3次。（可選項，視樣本質(zhì)量而定）

c）滴加破膜劑通透15min，PBST浸洗3min，重復(fù)3次。（可選項，一般情況下可不做）

d）用組化筆圈出玻片上的樣本區(qū)域，滴加3%過氧化氫覆蓋樣本區(qū)域，孵育10min，PBST浸洗3min，重復(fù)3次。

e）去除玻片上殘存洗液，滴加封閉液，覆蓋樣本區(qū)域，室溫保濕震蕩10-30min，除去封閉液。

2、一抗孵育

a）去除玻片上的封閉。

b）用移液器滴加稀釋的一抗溶液，浸沒樣本區(qū)域。

c）室溫保濕震蕩孵育1h（需針對不同抗體做優(yōu)化調(diào)整）。

d）用1×TBST buffer浸洗玻片3min，重復(fù)1次。

3、二抗孵育

a）去除玻片上殘存的洗液。

b）直接滴加HRP二抗工作液溶液，浸沒樣本區(qū)域。

c）室溫保濕孵育10min。

d）用1×TBST buffer浸洗玻片3min，重復(fù)1次。

4、熒光染色放大信號

a）去除玻片上殘存的洗液。

b）用移液器在玻片上滴加1×染料工作液100ul（使用信號放大液按1:100稀釋）浸沒樣本區(qū)域。

c）室溫保濕震蕩孵育10min。

d）1×TBST buffer浸洗玻片，室溫浸片3min。重復(fù)3次。

e）滴加抗體洗脫液（abs994），37℃孵育15-20min。

f）滅菌水洗片1次，1×TBST buffer浸片2min。

5、新一輪染色（單染可直接進(jìn)行第6步）

a）每輪染色結(jié)束后可用熒光顯微鏡確認(rèn)染色情況，注意用TBST覆蓋樣品，防止干片。

b）封閉：去除玻片上殘存洗液，滴加封閉液，覆蓋樣本區(qū)域，室溫保濕震蕩10-30min，除去封閉液。

c）重復(fù)步驟2-4。

d）多輪染色重復(fù)步驟5，結(jié)束后進(jìn)行染核及封片。

6、染核及封片

滴加1×DAPI工作液到樣品上，浸沒樣本區(qū)域，室溫孵育5min。用1×TBST浸洗玻片3次，每次2min。然后滴加抗熒光淬滅封片劑，用蓋玻片封片，避免氣泡，長期保存請用透明指甲油對蓋玻片邊緣進(jìn)行密封。

7、閱片，對染色后的組織片在熒光顯微鏡下觀察并分析。

五、結(jié)果說明：

1、微波修復(fù)抗原、孵育時間、溫度的改變均有可能得出錯誤結(jié)果。

2、在每次染色過程中，必須有組織陽性對照和試劑陰性對照實驗同時進(jìn)行。

3、若陽性組織對照不能顯示陽性染色，則應(yīng)判定該批次樣本的檢測結(jié)果無效。

六、產(chǎn)品性能指標(biāo)：

1、符合性：取符合性組織片（包括陽性組織片和陰性試劑對照），經(jīng)相應(yīng)的免疫組化試驗后，陽性對照染色結(jié)果為陽性，陰性對照染色結(jié)果為陰性。

2、批內(nèi)重復(fù)性：取同一批次的試劑盒，檢測同一組織切片3片，染色結(jié)果應(yīng)一致。
多重?zé)晒饷庖呓M化（mIHC）實驗操作演示視頻
七、染料信息表格

八、其他產(chǎn)品推薦