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| 品牌 | absin | 貨號 | abs60152 |
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| 規格 | 500U/2000U/10000U | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 1、體內或體外翻譯前 mRNA 的加帽; 2、mRNA 的 5'末端標記。 | 應用領域 | 化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥,綜合 |
| 產品描述 | |||||||||||||||||||||||||
| 描述 | 牛痘病毒加帽mei,來源于攜帶牛痘病毒 MR的重組大腸桿菌菌株,由 D1R 和 D12L 兩個亞基組成,兼具三種酶活性(RNA 三磷酸酶活性、鳥苷酸轉移酶活性和niao嘌呤甲基轉移酶活性)。牛痘病毒加帽mei是催化形成帽子結構的有效酶,能特異性地將 7-甲基鳥苷酸帽子結構(m7Gppp,Cap 0) 加至 RNA 的 5'端。帽子結構(Cap 0)對真核生物 mRNA 的穩定、轉運和翻譯有著重要的作用。通過酶促反應給RNA 加帽是一種有效簡單的方法,能顯著改善用于體外轉錄、轉染和顯微注射的 RNA 的穩定性和翻譯能力。
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| 來源 | 攜帶牛痘病毒MR的重組大腸桿菌 | ||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 1、體內或體外翻譯前 mRNA 的加帽; 2、mRNA 的 5'末端標記。 | ||||||||||||||||||||||||
| 純度 | ≥90% | ||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 反應體系和條件: 1、加帽反應(反應體系 20 μL) 本實驗步驟適用于 10μg RNA(≥ 100 nt)的加帽反應,可根據實驗需要放大: (1)取 10 μg RNA 至 1.5 mL 離心管中,使用無核酸酶水稀釋至 15 μL; (2)65℃加熱 5 min,然后取出冰浴 5 min 完成變性; (3)根據下表配制加帽體系
*10×加帽緩沖劑:0.5 M Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, (25℃, pH 8.0) (4)37℃孵育 30 min, RNA 加帽完成,可進行后續實驗。 2、5'末端標記反應(反應體系 20 μL) 本實驗步驟適用于 5'末端帶有三磷酸的RNA 標記,且可根據實驗需要放大,其標記效率受反應體系中 RNA 與 GTP 摩爾濃度比以及 RNA 樣本中 GTP 含量的影響: (1)取適量的 RNA 至 1.5 mL 離心管中,使用無核酸酶水稀釋至 14 μL; (2)65℃加熱 5 min,然后取出冰浴 5 min,完成變性; (3)根據下表配制 5'末端標記反應體系:
** GTP mix 為 GTP 和少量標記物,其中GTP 使用濃度參照注意事項 3。 | ||||||||||||||||||||||||
| 儲存/保存方法 | -20℃以下保存,避免反復凍融或頻繁暴露于溫度變化中,shou次使用時建議進行分裝。 | ||||||||||||||||||||||||
| 技術指標 | 質量控制: | ||||||||||||||||||||||||
| 注意事項 | 1、反應前熱處理 RNA,去除轉錄產物 5'末端的二級結構,若已知 RNA 5'末端的結構復雜,可以延長反應時間至 60 min,以提高加帽效率; 2、用于加帽反應的 RNA 在使用之前應進行純化并溶解于無核酸酶水。溶液中不能含有EDTA 和鹽; 3、5'末端標記反應體系中, GTP 儲液應稀釋為反應體系中 mRNA 摩爾濃度的 1-3 倍; 4、反應體系體積可根據實際需求按比例進行放大或縮小。 | ||||||||||||||||||||||||
| 參考文獻 | |||||||||||||||||||||||||
| 參考文獻 | [1] Mao X, Shuman S. Intrinsic RNA (guanine-7) methyltransferase activity of the vaccinia virus capping enzyme D1 subunit is stimulated by the D12 subunit. Identification of amino acid residues in the D1 protein required for subunit association and methyl group transfer. J Biol Chem. 1994;269(39):24472-24479. PMID: 7929111 [2] Grudzien E, Stepinski J, Jankowska-Anyszka M, Stolarski R, Darzynkiewicz E, Rhoads RE. Novel cap analogs for in vitro synthesis of mRNAs with high translational efficiency. RNA. 2004;10(9):1479-1487. PMID: 15317978 [3] Ramanathan A, Robb GB, Chan SH. mRNA capping: biological functions and applications. Nucleic Acids Res. 2016;44(16):7511-7526. PMID: 27317694 | ||||||||||||||||||||||||
| 研究領域 | |
| 研究領域 | Drug DiscoverymRNA Drug/Vaccine |
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