CEDLAP, DPD1, latency-associated peptide, TGF beta1, TGFB, TGFB1, TGF-beta 1 protein, TGFbeta 1, TGF-beta 1, TGFbeta, TGF-beta-1, transforming growth factor beta-1, transforming growth factor, beta

31.3pg/mL-2000pg/mL

需自備試驗器材
1. 酶標儀（可測量450nm檢測波長的吸收值及540nm或570nm校正波長的吸收值）
2. 高精度加液器及一次性吸頭
3. 蒸餾水或去離子水
4. 洗瓶（噴瓶）、多通道洗板器或自動洗板機
5. 500mL量筒

一、實驗前準備
1. 樣品收集及儲存
細胞培養上清：顆粒物應通過離心去除；立刻檢測樣本。樣本收集后若不及時檢測，建議按一次使用量分裝，凍存于-20℃冰箱內，避免反復凍融。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋。
血清：使用血清分離管（SST）收集樣本，樣品室溫放置30分鐘。離心15分鐘，轉速為1000g。立即取出血清，并立即檢測。樣本收集后若不及時檢測，建議按一次使用量分裝，凍存于≤-20℃冰箱內，避免反復凍融。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋。
血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸作為抗凝血劑收集血漿，在收集后30分鐘內離心15分鐘，轉速為1000g，并立即檢測。樣本收集后若不及時檢測，建議按一次使用量分裝，凍存于≤-20℃冰箱內，避免反復凍融。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋。
2. 檢測前準備工作（使用前請將所有試劑和樣本放置于室溫，靜置 15 分鐘。建議所有的實驗樣本和標準品做復孔檢測）
1×洗滌液配制：試劑盒中的濃縮洗滌液為20×母液，使用前需使用蒸餾水稀釋為1×工作液。例：取10mL濃縮洗滌液+240mL蒸餾水定容至200mL，實際操作時可先計算使用量，再進行配制。
顯色劑：按每孔100 µL，計算當次試驗所需要用量，取出相應體積的顯色劑，避光；取出的顯色劑僅供當日使用。
稀釋用緩沖液（1×）：試劑盒中為濃縮稀釋用緩沖液，應取49.3ml的1X洗滌液再加入0.7ml濃縮稀釋緩沖液，混勻即為1X工作液。
SA-HRP： SA-HRP為40×母液，使用前需使用稀釋緩沖液（1×）稀釋配制成1×工作液，每孔所需量為100 µL。例：使用了10個孔，則取25μL的40×母液+975uL稀釋用緩沖液（1×）定容至1mL，得到1ml的1×工作濃度的檢測抗體。
檢測抗體：檢測抗體的重溶體積請參考瓶身標簽，用稀釋用緩沖液重懸至相應體積。
標準品：凍干標準品的重溶體積請參考瓶身標簽， 得到濃度為 2,000 pg/mL 標準品母液。輕輕震搖至少 15 分鐘，其充分溶解。（標準品已經過活化處理，無需再次活化）每個稀釋管中加入 500μL 稀釋液（1×）。將標準品母液參照下圖做系列稀釋， 每管須充分混勻后再移液到下一管。   沒有稀釋的標準品母液可用作標準曲線最高點（2,000 pg/mL） ， 稀釋液（1×） 可用作標準曲線零點（0 pg/mL） 。1、準備好所有需要的試劑和標準品；
2、從已平衡至室溫的密封袋中取出微孔板，未用的板條請放回鋁箔袋內，重新封口；
3、分別將不同濃度標準品，實驗樣本或者質控品加入相應孔中，每孔 100 mL。用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育 2 小時。
4、將板內液體吸去，使用洗瓶、多通道洗板器或自動洗板機洗板。每孔加洗滌液 300 mL， 然后將板內洗滌液吸去。重復操作 3 次。每次洗板盡量吸去殘留液體會有助于得到好的實驗結果。最后一次洗板結束，請將板內所有液體吸干或將板倒置，在吸水紙拍干所有殘留液體；
5、在每個微孔內加入 100 mL 檢測抗體。用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育 2 小時；
6、重復第 4 步洗板操作；
7、在每個微孔內加入 100μL 稀釋好的鏈霉親和素-HRP，室溫孵育 20 分鐘。注意避光；
8、重復第 4 步洗板操作；
9、在每個微孔內加入 100 mL 顯色底物，室溫孵育 5-30 分鐘（一般情況下孵育時間在15 分鐘左右會得到較好的結果，但請根據實驗實際情況謹慎選擇終止顯色的時間）。注意避光；
10、在每個微孔內加入 50 mL 終止液，孔內溶液顏色會從藍色變為黃色。如果溶液顏色變為綠色或者顏色變化不一致，請輕拍微孔板，使溶液混合均勻；
11、加入終止液后 30 分鐘內，使用酶標儀測量 450 nm 的吸光度值，設定 540 nm 或 570nm 作為校正波長。如果沒有使用雙波長校正， 結果準確度可能會受影響；
12、計算結果：將每個標準品和樣品的校正吸光度值(OD450-OD540/OD570)、復孔讀數取平均值，然后減去平均零標準品 OD 值。使用計算機軟件作四參數邏輯(4-PL)曲線擬合創建標準曲線。另一種方法是，可以通過繪制標準品濃度做對數與相應 OD 值對數生成曲線， 并通過回歸分析確定最佳擬合線。這個過程可生成一個足夠使用但不太精確的數據擬合。若樣本經過稀釋，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

三、試劑盒參數
1. 靈敏度：小鼠 TGF-beta 1 的zui低可測值一般小于 6.8 pg/mL。zui低可測值是根據 20 個標準曲線零點吸光值的平均值加兩倍標準差計算得到的相對應濃度。
2. 校正：此 ELISA 試劑盒經由 CHO 細胞表達的高純度重組小鼠 TGF-beta 1 蛋白校正。
3. 線性：6 個不同的樣本中摻入高濃度的小鼠 TGF-beta 1，然后用稀釋劑（1×）將樣本稀釋到檢測范圍內，測定其線性。
四、常見問題解析
1. 白板（顯色完成后，無顏色出現）
2. 花板（空白、陰性陽性對照正常，但標本孔OD值明顯偏高）

五、實驗流程圖

轉化生長因子（TGF）Beta 1、2 和 3（TGF-beta 1，TGF-beta 2 和 TGF-beta 3）是高度多效性細胞因子，幾乎所有細胞類型都可以分泌。TGF-beta 分子被建議用作調節免疫功能，增殖和上皮-間質轉化等過程的細胞開關。這些基因在小鼠中的靶向缺失表明每種TGF-beta 亞型均具有某些非冗余功能：TGF-beta 1 參與造血和內皮細胞分化；TGF-beta 2 影響心臟，肺，顱面，肢體，眼睛，耳朵和泌尿生殖系統的發育；TGF-beta 3 會影響腭器官發育形成和肺部發育。TGF-beta 5 的全部體外生物學活性目前仍尚未被wan全探索。但是， 在抑制性生物測定中，已發現 TGF-beta 1，TGF-beta 2，TGF-beta 3 和 TGF-beta 5 在很大程度上可互換，并且預計 TGF-beta 5 將顯示出一系列相似的活性其他 TGF-beta 家族成員。迄今為止，僅在非洲爪蟾中證明了 TGF-beta 5 的產生。   TGF-beta 配體最初被合成為經歷蛋白水解切割的前體蛋白。成熟的區段通過由特征性的“半胱suan酸結"組成的富含二硫鍵的核形成活性配體二聚體。 TGF-beta 信號轉導始于與附件受體 beta 聚糖（也稱為 TGF-beta RIII）和 II 型絲氨suan/蘇氨suan激酶受體（稱為 TGF-beta RII）的復合物結合。然后，該受體磷酸化并激活 I 型絲氨suan/蘇氨suan激酶受體，即 ALK-1 或 TGF-beta RI（也稱為 ALK-5）。激活的 I 型受體磷酸化并激活調節轉錄的 Smad 蛋白。使用不依賴 Smad 的其他信號通路可以在不同情況下觀察到對 TGF-beta 的不同反應。

Mouse

1、僅供科研使用，不可用于體外診斷；
2、請在試劑盒有效期內使用；
3、不同試劑盒及不同批號試劑盒的組分不能混用；
4、樣本值若大于標準曲線的最高值，應將樣本用稀釋劑（1×）稀釋后重新檢測；若細胞培養上清液樣本需分布稀釋，除最后一步用稀釋劑稀釋外，其它中間稀釋可采用細胞培養基；
5、檢測結果的不同可由多種因素引起，包括實驗人員的操作、移液器的使用方式、洗板技術、反應時間或溫度、試劑盒的儲存等。
6、試劑盒中的終止液是酸性溶液，使用時請做好眼睛、手、面部及衣服的防護。